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TA克隆

    TA克隆技术(TA cloning)利用Taq聚合酶具有末端转移酶(TdT)活性,但却不具有3'-5'端外切酶校准活性的特点,可在PCR产物的3'端加上一个非模板依赖碱基“A”。pMD18-T是一种高效克隆PCR产物的专用载体,它是由pUC18载体在Xba I和Sal I识别位点间插入一个EcoR V位点,然后用EcoR V进行酶切使质粒线性化,并在它的3'端添加“T”构建而成。因其3'端带有一个突出的“T”尾,能高效地与带“A”尾的PCR产物连接,极大地提高了克隆的效率。TA克隆是目前克隆PCR产物最简便、快捷的方法。

 


pMD18-T载体结构图



 


TA克隆原理图



技术路线 



送样要求
1. 请提供克隆片段的相关信息,包括名称、大小、样品是否带有“A”尾以及PCR产物是否已纯化。已纯化的PCR产物请确保使用的溶剂为灭菌的双蒸水。
2. PCR已纯化样品:浓度≥20ng/µl,体积≥20µl;PCR未纯化样品:浓度≥50ng/µl, 体积≥25µl。所需DNA的总量会随片段大小的不同而有所变化。样品定量检测结果以我们为准。
3. 请务必在订单上注明 PCR所用引物序列,以便用于克隆结果的核对分析。
4. 当克隆结果中包含合作伙伴提供的单向部分引物序列,我们即视实验成功,将收取全额的实验费用。
5. 若序列中包含高GC、Poly等特殊或复杂结构导致测序中断,我们即视实验成功,将收取全额的实验费用。
6. 项目完成一个月后,若合作伙伴无要求返还菌液或质粒等,则我们将代为销毁。

提供结果
1.    高纯度质粒,大约2μg DNA,OD值在1.80-2.00之间
2.    含有重组质粒的甘油菌
3.    测序原始图谱和序列
4.    去载体后的序列
5.    要求测通的样品则提供拼接序列